Optimalizace postupů hodnocení antibakteriální aktivity vybraných účinných látek vůči zvolenému spektru bakteriálních patogenů
Abstrakt
Tato práce pojednává o optimalizaci postupů hodnocení antibakteriální aktivity účinných látek vůči bakteriálním patogenům Pectobacterium carotovorum, Pseudomonas syringae pv. tomati a Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Literární rešerše se zabývá proteiny hlíz brambor, především proteiny s antibakteriální aktivitou, dále je uveden stručný přehled mechanismů účinku rostlinného obranného systému vůči patogenním mikroorganismům a účinku antimikrobiálních látek na bakteriální patogeny. Experimentální část práce se zabývá optimalizací metody stanovení titru bakterií pomocí McFarlandových standardů, stanovení koncentrace bakteriální suspenze pomocí MPN metody a hodnocením antibakteriální účinnosti vybrané skupiny aktivních látek pomocí resazurinového testu. Bylo zjištěno, že v souvislosti s rostoucí optickou densitou měřenou spektrometrem při 620 nm roste zároveň i koncentrace bakteriální suspenze (CFU/ml). U použitých proteinů hlíz brambor odrůd Bella a Westamyl byla pomocí metody SDS-PAGE identifikována skupina bílkovin patatinového komplexu a skupina inhibitorů proteas, u kterých došlo vlivem esterifikace methylací v posunu molekulové hmotnosti. Antimikrobiální aktivita těchto proteinů byla ověřena v resazurinovém testu, kde byla zjištěna inhibiční schopnost modifikovaných hlízových proteinů odrůd Bella a Westamyl ve vyšších koncentracích (10 mg/ml) vůči bakterii Pseudomanas syringae pv. tomati.